Thermo Fisher（賽默飛）Countess 3 FL細(xì)胞計數(shù)儀——光立方與GFP檢測的結(jié)合

Countess 3 FL細(xì)胞計數(shù)儀與光立方概念

賽默飛的Countess 3 FL細(xì)胞計數(shù)儀是一款高度智能化、支持多通道熒光檢測的自動細(xì)胞計數(shù)儀。光立方（Light Cube） 是該儀器中的一個核心技術(shù)組件，用于支持多種熒光染料的高效檢測和分析。光立方內(nèi)置了激發(fā)光源和熒光濾光片，能夠針對特定熒光信號（如 GFP）進(jìn)行靈敏捕獲和分析。

• GFP（Green Fluorescent Protein，綠色熒光蛋白） 是熒光生物標(biāo)記中的分子，廣泛應(yīng)用于基因編輯、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和標(biāo)記特定細(xì)胞亞群等實驗。

• Countess 3 FL通過其光立方技術(shù)，可以精準(zhǔn)檢測 GFP 發(fā)出的綠色熒光信號，實現(xiàn)對 GFP 標(biāo)記細(xì)胞的高效篩選與計數(shù)。

光立方的原理與功能

光立方是Countess 3 FL儀器中負(fù)責(zé)熒光檢測的核心模塊。它包括以下兩個關(guān)鍵部件：

1. 激發(fā)光源：

• 為熒光染料提供激發(fā)能量，常使用LED作為激發(fā)光源。

• GFP的激發(fā)光波長范圍為 470 nm（藍(lán)光）。

2. 熒光濾光片：

• 用于選擇性捕捉熒光染料發(fā)射的特定波長。

• GFP的發(fā)射光波長為 510 nm（綠色光），光立方會精準(zhǔn)過濾出這一波長的熒光信號。

光立方的特點：

• 靈活性強：不同的光立方可對應(yīng)不同的熒光標(biāo)記染料（如 GFP、RFP、DAPI 等），用戶可以根據(jù)實驗需求進(jìn)行快速更換。

• 精確性高：每個光立方經(jīng)過嚴(yán)格校準(zhǔn)，能夠高效分辨微弱熒光信號。

• 易操作：光立方模塊的插拔設(shè)計簡單，用戶無需復(fù)雜調(diào)整即可完成更換。

GFP檢測的應(yīng)用場景

GFP作為標(biāo)記蛋白，常用于以下實驗場景，而Countess 3 FL的光立方技術(shù)能夠提供高靈敏度的檢測支持：

1. 轉(zhuǎn)染效率評估

在基因編輯或轉(zhuǎn)染實驗中，科研人員通常會使用 GFP 作為報告基因。Countess 3 FL能夠：

• 精確計數(shù) GFP 陽性細(xì)胞的數(shù)量。

• 快速計算轉(zhuǎn)染效率（GFP 陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)）。

2. 熒光標(biāo)記細(xì)胞的篩選

通過 GFP 標(biāo)記特定細(xì)胞亞群（如腫瘤細(xì)胞或免疫細(xì)胞），Countess 3 FL可快速識別 GFP 陽性細(xì)胞并輸出數(shù)量比例，為細(xì)胞分選和后續(xù)實驗提供數(shù)據(jù)支持。

3. 基因表達(dá)分析

GFP常用于監(jiān)測目標(biāo)基因的表達(dá)水平。Countess 3 FL結(jié)合其熒光檢測功能，能夠高效量化 GFP 表達(dá)的強度與細(xì)胞數(shù)量。

4. 細(xì)胞追蹤與動態(tài)研究

在細(xì)胞追蹤實驗中，GFP用于標(biāo)記細(xì)胞遷移或分化行為。Countess 3 FL的熒光模塊能夠捕捉標(biāo)記細(xì)胞的實時狀態(tài)，并提供數(shù)據(jù)分析。

Countess 3 FL的檢測流程（以GFP為例）

1. 樣本制備：

• 將含有 GFP 標(biāo)記的細(xì)胞樣本制備為懸液，濃度推薦為 1 × 10? 至 1 × 10? 個細(xì)胞/mL。

• 根據(jù)實驗需求，可加入臺盼藍(lán)進(jìn)行活力分析。

2. 樣本加載：

• 使用專用計數(shù)載片，取 10 µL 樣本并加載至載片中，確保樣本分布均勻。

3. 選擇檢測模式：

• 插入含 GFP 檢測功能的光立方。

• 在儀器界面選擇 GFP 通道（470/510 nm）進(jìn)行熒光檢測。

4. 結(jié)果讀取與分析：

• 儀器自動對樣本進(jìn)行圖像捕獲和熒光分析，顯示 GFP 陽性細(xì)胞的數(shù)量和總細(xì)胞數(shù)。

• 系統(tǒng)自動計算 GFP 陽性比例，并生成數(shù)據(jù)報告。

5. 數(shù)據(jù)存儲與導(dǎo)出：

• 將實驗結(jié)果通過 USB 導(dǎo)出為 Excel 文件或高清圖像，用于后續(xù)分析或歸檔。

Countess 3 FL光立方支持的熒光染料

除了 GFP 外，Countess 3 FL還支持以下常見熒光染料：

• RFP（紅色熒光蛋白）：檢測波長范圍為 535/615 nm。

• DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）：用于染色細(xì)胞核，檢測波長為 360/460 nm。

• mCherry：另一種紅色熒光蛋白，常用于與 GFP 組合實驗。

科研人員可根據(jù)實驗需求選擇相應(yīng)的光立方，并靈活切換不同的熒光檢測模式。

技術(shù)優(yōu)勢總結(jié)

GFP檢測的核心優(yōu)勢：

1. 靈敏度高：光立方模塊對 GFP 熒光信號的檢測具有靈敏度，即使熒光信號較弱也能準(zhǔn)確識別。

2. 多功能性：不僅支持 GFP 標(biāo)記檢測，還可同時進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和活力分析。

3. 高效性：檢測時間短，每個樣本僅需幾秒即可完成分析。

4. 便捷性：光立方設(shè)計可快速更換，無需復(fù)雜的硬件調(diào)整。

5. 高分辨率成像：支持高清細(xì)胞圖像捕捉，實驗結(jié)果更直觀。

Thermo賽默飛 3FL細(xì)胞計數(shù)儀光立方應(yīng)用領(lǐng)域

1. 細(xì)胞生物學(xué)：研究細(xì)胞增殖、分化及遷移。

2. 基因編輯與轉(zhuǎn)染研究：評估轉(zhuǎn)染效率、基因表達(dá)水平。

3. 免疫學(xué)與腫瘤學(xué)：篩選 GFP 標(biāo)記的免疫細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞。

4. 藥物篩選：分析藥物對 GFP 陽性細(xì)胞的影響。

Thermo賽默飛 3FL細(xì)胞計數(shù)儀光立方總結(jié)

賽默飛Countess 3 FL細(xì)胞計數(shù)儀通過其光立方技術(shù)和多通道熒光檢測功能，為 GFP 標(biāo)記實驗提供了高效、精確、便捷的解決方案。這款儀器不僅提升了細(xì)胞計數(shù)和熒光分析的效率，還能滿足各種復(fù)雜實驗需求，是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的實驗室工具。