賽默飛實時熒光定量PCR儀ViiA 7（Applied Biosystems）是一款專為實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）設(shè)計的設(shè)備。它廣泛應(yīng)用于基因表達分析、基因突變檢測、微生物鑒定、病毒檢測等領(lǐng)域。ViiA 7能夠通過實時監(jiān)測PCR反應(yīng)中的熒光信號變化，準(zhǔn)確地提供樣品中目標(biāo)基因的初始拷貝數(shù)。本文將詳細(xì)介紹ViiA 7實時熒光定量PCR儀的工作原理、特點、應(yīng)用以及優(yōu)勢。

1. 實時熒光定量PCR技術(shù)概述

實時熒光定量PCR技術(shù)（qPCR）是一種能夠在PCR反應(yīng)過程中實時監(jiān)測擴增過程的方法。與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)不同，qPCR通過熒光探針或染料在每個擴增循環(huán)中釋放的熒光信號來定量分析DNA樣本的初始量。PCR反應(yīng)利用特定的引物和探針，在溫度變化的循環(huán)中對目標(biāo)DNA進行擴增，并通過熒光信號強度的變化監(jiān)測擴增進程，從而定量初始模板。

傳統(tǒng)PCR需要在反應(yīng)結(jié)束后通過凝膠電泳等方法才能分析結(jié)果，而qPCR通過實時測量擴增過程中熒光信號的變化，提供了高靈敏度和高通量的定量信息。

2. ViiA 7實時熒光定量PCR儀工作原理

ViiA 7實時熒光定量PCR儀的工作原理基于熒光信號的檢測。其核心過程包括模板DNA的擴增、熒光信號的采集和數(shù)據(jù)分析。以下是ViiA 7工作原理的詳細(xì)步驟：

2.1 PCR反應(yīng)過程

實時PCR過程包含三個主要步驟：變性、退火和延伸。在每個循環(huán)中，ViiA 7都會實時記錄熒光信號的變化，隨著PCR反應(yīng)的進行，信號強度會增加。這一過程具體如下：

1. 變性：在高溫下，DNA雙鏈分離為單鏈。

2. 退火：溫度下降，引物與模板DNA結(jié)合，形成DNA-引物復(fù)合物。

3. 延伸：在適宜的溫度下，DNA聚合酶根據(jù)模板DNA合成新的DNA鏈。

隨著反應(yīng)的進行，目標(biāo)DNA數(shù)量的不斷增加，熒光信號也會逐漸增強。ViiA 7系統(tǒng)通過熒光信號的變化，來計算樣品中目標(biāo)基因的初始拷貝數(shù)。

2.2 熒光信號檢測

ViiA 7使用高靈敏度的熒光探測系統(tǒng)，能夠在每個PCR循環(huán)結(jié)束時實時采集熒光信號。熒光探針或染料在擴增過程中與特定的DNA序列結(jié)合，產(chǎn)生熒光。ViiA 7可以使用不同類型的熒光染料和探針，如SYBR Green、TaqMan探針等。

• SYBR Green：一種常用的熒光染料，能夠結(jié)合雙鏈DNA并在激發(fā)光照射下發(fā)射熒光。由于其非特異性結(jié)合方式，它適用于所有類型的目標(biāo)序列。

• TaqMan探針：是一種具有熒光標(biāo)記的探針，其通過與目標(biāo)DNA的特異性結(jié)合，在擴增過程中產(chǎn)生熒光信號。

每個熒光信號的強度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此可以通過熒光信號的變化來定量目標(biāo)DNA。

2.3 熒光信號與CT值的關(guān)系

在qPCR實驗中，檢測到的熒光信號會隨著每個循環(huán)的進行而增加。實驗通常使用CT（閾值周期）值來表示熒光信號明顯超過背景噪音的周期數(shù)。CT值越低，表示樣品中目標(biāo)基因的初始拷貝數(shù)越多。

ViiA 7通過精確計算CT值和樣品中目標(biāo)DNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線，能夠進行定量分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線通常由一系列已知濃度的模板DNA構(gòu)建，通過比較樣品的CT值與標(biāo)準(zhǔn)曲線的對應(yīng)關(guān)系，最終可以計算出目標(biāo)基因的初始拷貝數(shù)。

2.4 多重PCR和多重?zé)晒鈾z測

ViiA 7支持多重PCR技術(shù)，即同時檢測多個目標(biāo)基因。通過使用不同波長的熒光標(biāo)記物，可以在一個反應(yīng)中同時檢測多個基因的擴增。每個熒光染料或探針與特定的目標(biāo)基因結(jié)合，通過不同的熒光信號進行區(qū)分。這種多重PCR技術(shù)在高通量篩選和基因表達分析中非常有用。

3. ViiA 7實時熒光定量PCR儀的主要特點

ViiA 7實時熒光定量PCR儀具有多項創(chuàng)新技術(shù)優(yōu)勢，使其成為科研和臨床實驗中非常可靠的工具。以下是ViiA 7的一些主要特點：

3.1 高靈敏度和高分辨率

ViiA 7采用了先進的熒光探測系統(tǒng)，具有靈敏度和分辨率，能夠檢測到極低濃度的目標(biāo)DNA。其精準(zhǔn)的熒光信號采集能力，確保了實驗結(jié)果的高可靠性和重復(fù)性。

3.2 精確的溫控系統(tǒng)

ViiA 7配備了精確的溫控系統(tǒng)，能夠精確控制PCR反應(yīng)的溫度變化，確保每個擴增循環(huán)的準(zhǔn)確執(zhí)行。這對于復(fù)雜的基因擴增和多重PCR反應(yīng)尤為重要。

3.3 靈活的實驗設(shè)計和自動化分析

ViiA 7的用戶界面簡潔直觀，支持靈活的實驗設(shè)計。通過軟件，用戶可以根據(jù)需要設(shè)定PCR反應(yīng)的條件，選擇合適的熒光染料或探針。此外，ViiA 7配備了自動化分析工具，可以自動進行數(shù)據(jù)處理和結(jié)果分析，極大地提高了實驗效率。

3.4 多樣的檢測模式

ViiA 7支持多種檢測模式，包括SYBR Green染料法、TaqMan探針法和多重PCR檢測，用戶可以根據(jù)實驗需求選擇合適的模式。這些模式的結(jié)合，使得ViiA 7在基因表達分析、基因突變檢測和病原微生物檢測等多個領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。

3.5 良好的數(shù)據(jù)管理和可視化功能

ViiA 7配備了強大的數(shù)據(jù)管理和可視化功能，用戶可以方便地查看實驗結(jié)果、生成報告并進行數(shù)據(jù)存儲。其內(nèi)置的分析軟件能夠提供詳細(xì)的CT值、標(biāo)準(zhǔn)曲線、效率分析等信息，并支持與其他實驗數(shù)據(jù)的比較。

4. ViiA 7的應(yīng)用領(lǐng)域

ViiA 7在多個領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，特別是在基因表達分析、病毒檢測、基因突變篩查等方面具有重要意義。

4.1 基因表達分析

ViiA 7廣泛應(yīng)用于基因表達定量分析，研究人員通過實時qPCR技術(shù)，能夠監(jiān)測不同條件下基因的表達變化。這對于研究基因調(diào)控機制、篩選藥物靶點、分析疾病相關(guān)基因等具有重要意義。

4.2 病毒檢測

ViiA 7可用于病毒的定量檢測，特別是在臨床檢測中，如新冠病毒檢測、HIV病毒檢測、乙肝病毒檢測等。實時qPCR技術(shù)能夠在病毒量極低時準(zhǔn)確檢測，并且能夠快速出具檢測結(jié)果。

4.3 基因突變檢測

ViiA 7可用于檢測基因突變，尤其是單核苷酸多態(tài)性（SNP）和插入/缺失（Indel）變異。通過設(shè)計特異性探針，可以快速準(zhǔn)確地識別和定量突變的存在。

4.4 微生物檢測

ViiA 7還可以用于微生物檢測，如細(xì)菌、真菌等病原微生物的定量分析。通過實時PCR技術(shù)，能夠在樣本中快速檢測到微生物的存在，并對其進行定量分析。

5. 總結(jié)

賽默飛ViiA 7實時熒光定量PCR儀是一款高性能的PCR分析工具，具有靈敏度高、溫控精確、實驗靈活等優(yōu)點。它通過實時監(jiān)測PCR反應(yīng)中的熒光信號，能夠提供準(zhǔn)確的定量數(shù)據(jù)，廣泛應(yīng)用于基因表達、病毒檢測、基因突變分析等多個領(lǐng)域。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，ViiA 7的應(yīng)用前景將越來越廣泛，成為科研和臨床實驗中的重要工具。